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高效實現(xiàn)細胞表面與胞內(nèi)蛋白共染的流式細胞處理方法

在科研和臨床診斷中，因流式細胞術可以對細胞內(nèi)的生物標志物進行免疫染色和鑒定，其在鑒定細胞表型和功能中的應用已越來越重要。在細胞表型鑒定工作中，由于一些典型的膜分子定位在細胞質(zhì)內(nèi)，如未分化白細胞的CD3和CD22定位在細胞質(zhì)中，因此除了對細胞表面分子的染色，細胞內(nèi)生物分子的免疫染色是必不可少的。

為了使細胞內(nèi)生物分子的免疫染色達到更好的效果，Nordic-MUbio推出了一款適用于流式細胞固定和通透的試劑盒 FIX&PERM®，該試劑盒可以同時對細胞表面和細胞內(nèi)的生物標志物進行免疫染色，將整個流式細胞免疫染色時間縮短到1h以內(nèi)，為細胞內(nèi)生物分子的鑒定提供了一種更好、更高效的選擇。有研究者使用FIX&PERM®試劑盒，對多種細胞表面CD分子和細胞內(nèi)Ki-67（一種細胞內(nèi)的增殖標志物）進行雙重染色，通過流式分析增殖細胞（Ki-67陽性）數(shù)量，來證明疾病狀態(tài)之間存在著顯著差異。

FIX&PERM®試劑盒由A液和B液兩個試劑構成，其中A液能夠溫和地固定細胞，B液則起到通透細胞膜的作用。FIX&PERM®試劑盒的獨特配方能有效地降低背景，把通透液和抗體一起加入細胞，還能讓抗體更高效地穿過細胞膜，與細胞內(nèi)生物分子結合（如細胞質(zhì)或核酶、癌蛋白、細胞因子、免疫球蛋白等）。

FIX&PERM® Cell Fixation and Permeabilization Kit

貨號: GAS-002

規(guī)格：8 x 5ml

應用：Flow Cytometry

FIX&PERM®優(yōu)勢特點：

固定細胞更加溫和，保持細胞在流式細胞儀中的分散性；
可同時對細胞內(nèi)和細胞表面的生物分子進行雙重染色；
用時更短——-整個處理過程可在1h內(nèi)完成，處理后的細胞可以立即檢測，也可以暫時保存后檢測（不超過24h）；
質(zhì)控更嚴格——每個批次產(chǎn)品都要用已標定的血液樣本檢測，通過比較獲得的白細胞分散性特征來確保不同批次試劑盒的一致性和穩(wěn)定性。
FIX&PERM®試劑盒還可搭配Nordic-MUbio的細胞內(nèi)生物標志物抗體，使流式檢測效果更佳。

FIX&PERM®使用方法

取50μl待測樣品（如全血、骨髓或單核細胞懸液）于5ml離心管中；
加入100 μl A液（固定液），室溫孵育15min；
加入5ml PBS，300g離心5min；
移除上清，加入100μl B液（通透液）和20μl流式抗體，低速渦旋1-2s；
室溫孵育15min；
參照第3步，用PBS再洗一遍細胞；
移除上清，用鞘液重懸細胞后做流式分析；如不能立即檢測，可用0.5ml 1.0%甲醛重懸細胞，2-8℃避光保存，并在24h內(nèi)檢測。

Nordi-MUbio熱銷單克隆流式抗體

Nordic-MUbio還提供了一些列小鼠抗人PE/FITC耦連單克隆流式抗體，與FIX&PERM®試劑盒配合使用效果更佳。

抗原	克隆	IgG類型	抗體偶聯(lián)物	規(guī)格	貨號
CD3	UCHT1	IgG1	Purified	0.2 mg	GM-4011
			FITC-labeled	100 tests	GM-4012
			PE-labeled	100 tests	GM-4013
CD22	RFB4	IgG1	Purified	0.2 mg	GM-4051
			FITC-labeled	100 tests	GM-4052
			PE-labeled	100 tests	GM-4053
Lactoferrin	4C5	IgG1	Purified	0.2 mg	GM-4111
Lactoferrin	4C5	IgG1	PE-labeled	100 tests	GM-4113
Myeloperoxidase	8E6	IgG1	Purified	0.2 mg	GM-4191
(MPO-C2)			FITC-labeled	100 tests	GM-4192
(MPO-C2)			PE-labeled	100 tests	GM-4193
Lysozyme	LZ-2	IgG1	Purified	0.2 mg	GM-4131
Lysozyme	LZ-2	IgG1	FITC-labeled	100 tests	GM-4132
CD68	Ki-M7	IgG1	FITC-labeled	100 tests	GM-4152
IL-1 beta	FIB3	IgG1	FITC-labeled	100 tests	GM-4162
IFN-gamma	GZ4	IgG1	FITC-labeled	100 tests	GM-4172
Negative control	Vl-AP	IgG1	FITC-labeled	50 tests	GIC-201
Negative control	Vl-AP	IgG1	PE-labeled	50 tests	-
Lysozyme	LZ-2	IgG1	FITC-labeled	50 tests	GIC-206
Lactoferrin	4C5	IgG1	PE-labeled	50 tests	-
Myeloperoxidase	8E6	IgG1	FITC-labeled	50 tests	GIC-212
Lactoferrin	4C5	IgG1	PE-labeled	50 tests	-
Myeloperoxidase	8E6	IgG1	FITC-labeled	50 tests	GIC-213
CD3	UCHT1	IgG1	PE-labeled	50 tests	-
Myeloperoxidase	8E6	IgG1	FITC-labeled	50 tests	GIC-214
CD22	RFB4	IgG1	PE-labeled	50 tests

圖1 Flow cytrometric analysis of normal bone marrow (BM) after fixation and pemeabilization using GAS-002, followed by immunostaining for lactoferrin and MPO-C2.

圖2 Immunostaining with Nordic-MUbio CD22-PE conjugate of undifferentiated leukemia cells of B-ALL type.

圖3 Immunostaining with Nordic-MUbio CD3-PE conjugate of surface CD3-negative undifferentiated leukemia cells of T-ALL type.

北京西美杰科技有限公司作為一站式生物試劑采購供應商，致力于整合全球優(yōu)質(zhì)資源，為生物研究領域客戶提供豐富的產(chǎn)品與專業(yè)的服務。北京西美杰是Nordic-MUbio品牌中國區(qū)一級代理，為客戶提供完善的技術支持與售后服務。如對上述產(chǎn)品感興趣，歡迎隨時撥打西美杰客服熱線400-050-4006或登錄西美杰官網(wǎng)m.14ystar.com查詢訂購。

參考文獻：

Nies KPH, Kraaijvanger R, Lindelauf KHK, Drent RJMR, Rutten RMJ, Ramaekers FCS, Leers MPG. Determination of the proliferative fractions in differentiating hematopoietic cell lineages of normal bone marrow. Cytometry A. (2018) 93, 1097-1105 . doi: 10.1002/cyto.a.23564.